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胰岛素(INS)放免试剂盒检测准确性高吗?

发布时间:2019-06-17   点击次数:89次

胰岛素(INS)放免试剂盒检测准确性高吗?

很多老师在检测胰岛素这个指标的时候,经常问我们这个指标使用什么方法检测,如果用放免检测,准确性高吗。胰岛素这个指标在检测选择方法的时候,ELISA和放免都是可以的,但是论检测的准确性和灵敏度以及重复性,我们还是推荐使用放免的方法,临床上也常常使用放免的方法来检测胰岛素含量。下面让我们一起来了解一下胰岛素放免试剂盒的组成和原理吧。

胰岛素(INS)放免试剂盒

[药品名称] 通用名:典[ 125I]- 胰岛素放射免疫分析药盒盒

汉语拼音:Dian[ 125I] Yidaosu Fangshemianyifenxi Yaohe

英文名:Iodine[ 125I]- Insulin Radioimmunoassay Kit

简称:典[ 125I] 胰岛素(Ins)放免药盒

[使用目的] 用于定量测定人血清或血浆中胰岛素(Ins)的浓度。

[用途] 胰岛素的测定主要用于对糖尿病的分型,即通过胰岛素释放实验,区分糖尿病的类型。 另外对于研究胰岛素β细胞的分泌功能、胰岛素瘤的分析、探讨冠心病机理等也有一定的意 义。

[试验原理] 本品采用了第二抗体+聚已二醇沉淀法放射免疫分析试验原理:含胰岛素(Ins)的样 品和 125I 标记的胰岛素(Ins)与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。反应后加入二抗及 PEG,使免疫复合物沉淀,离心,测沉淀放射性计数。通过标准曲线得到样本中胰岛素(Ins) 的浓度。

[试剂主要组成成分] 1、 胰岛素标准品:6 瓶,冻干品 A-F,浓度分别为 7、20、40、90、180、350mIU/L,使用 时加 1。0ml 温育液溶解。 2、质控血清:两瓶,冻干品,使用时加 0。5ml 蒸馏水溶解。 浓度为: L: H: 3、抗 Insulin 血清: 一瓶,蓝色溶液,2~8℃冷存。 4、125I-Insulin 标记物:冻干品 1 瓶,< 88。23 kBq/100T,50 管加 5。5ml,100 管加 11ml,200 管加 22ml 温育液溶解。 5、分离剂: 一瓶,含二抗血清、PEG 等,充分摇匀后使用,2~8℃冷存。 6、温育液:一瓶,2~8℃冷存。 [仪器] 1、 γ-计数器 2、低温离心机 样本收集和保存: 220 微升人血清样本。 采静脉血 5ml 于塑料试管中,静置使其凝固后,1500 转/分离心,取其上清液,放置玻 璃瓶中。如果样本不立即使用,可在-18℃~-25℃储存 6 个月。 严重溶血、高浓度的脂类、胆红素对测定结果有影响。

[使用前准备] 试验前,恢复样本至室温,小心摇匀血清样本。 [实验方法] 1、 将实验所需试剂及样本放置室温,冻干品按操作要求进行溶解,平衡至少 30 分钟 以上才可进行操作; 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管进行编号,所有实验均做双管重复; 3、 每个 NSB 管加入 200µl 温育液,每个标准品“0”管 加入 100µl 温育液; 4、 取每个浓度的标准品(A~F)、质控血清和样本 100µl 加入相应编号的试管中; 5、 每管均各加入 100µl 标记物工作液; 6、 每管均各加入 100µl 抗体工作液,充分混匀; 7、 37℃温育 2 小时; 8、 每管均各加入 500µl 分离剂后,充分混匀; 9、 室温放置 15 分钟后,离心 3500 转/分,20 分钟后,吸去或倾倒掉上清液; 10、 用 γ-计数器测定各管计数 CPM. 推荐检测时间: 1 分钟; 11、 从标准曲线上读取样本及质控血清的浓度。

[实验过程中应注意] 1、 γ-计数器本底计数应≤100CPM/分,效率应≥75%; 2、 加入放射性标记物时,应做好防护、小心谨慎,以避免造成放射性污染; 3、 如果某一个样本的测定值高于高浓度的标准品浓度,用零标准品以 1:2 或 1: 4 的比例稀释样本后重新测试,测试结果乘以相应的稀释倍数。

[质量控制] 每次实验操作应至少采用两个浓度的质控血清进行质量控制,以确保每次实验测定结果 的可靠性。 100 100 1、 质控血清的平均值应在允许范围内; 2、 曲线方程应采用佳拟合方式; 3、 重复样本的测定结果相差在 15%以内。 如不能同时满足以上条件,则此次试验结果无效,全部试验需重新进行。

[测定结果的计算] 1、 计算标准品(A~F)、质控品和样品与标准品 0 的比值(B/B0); 2、 剂量-反应曲线按“对数剂量-结合率对数”(Log(dose-Log(B/Bmax))数学模型 或四参数数学模型拟合,通过每个标准品的 B/B0和其浓度建立标准曲线; 3、 从标准曲线上查出样本的浓度值,B/B0不在标准曲线之内的样本及其浓度

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