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T细胞亚群检测试剂盒应该如何正确使用-上海信帆生物为您答疑解惑

发布时间:2019-12-17   点击次数:64次

T细胞亚群检测试剂盒应该如何正确使用-上海信帆生物为您答疑解惑

本公司供应T细胞亚群检测试剂盒,产品质量稳定,备有大量现货,发货周期快,顺丰包邮。大家有需要可以随时咨询!

 

T细胞亚群检测试剂盒说明书

一:试剂盒组成:

1.

防脱片剂

2ml

2.

固定液

10ml

3.

A小鼠抗人CD3单抗

1ml

 

B小鼠抗人CD4单抗

1ml

 

C小鼠抗人CD8单抗

1ml

4.

生物素标记羊抗小鼠IgG( IgG/Bio)

3ml

5.

碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP)

3ml

6.

A底物增强剂(40×)

200μl

 

B底物液(40×)

200μl

 

C底物缓冲液(10×)

800μl

7.

细胞核复染液

5ml

8.

封片剂

1ml

9.

记号笔

1支

10.

PBS

2包(1000ml)

二:标本制备:

 

取肝素抗凝(25μl/ml)的静脉血1~2ml,PBS稀释1-2倍后,沿装有等量淋巴细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层,保持两种液体界面清晰,离心(2000转/分)15-20分钟,吸取两液面交界处的单个核细胞层,加5倍PBS,离心(1000转/分)5分钟,弃上清液,沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流液体(约一滴)混匀细胞,制成单个核细胞悬液。滴30μl细胞悬液于载玻片上,静置2分钟使细胞下沉粘附于玻片上,吸去液体,快速吹干或37℃温箱1小时烤干。或用PBS将单个核细胞调至2×105个/ml,离心涂片机1000转离心1-2分钟制片,快速吹干或37℃温箱1小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl均匀推片,亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上,待干后制备细胞涂片,以防掉片。

 

三:显色剂的配制:

分别取A液25ul,B液25ul置于干净试管中混匀,室温放置2-5分钟,加1ml蒸馏水,混匀,再加C液100ul待用。

*使用前,根据所需显色剂用量,按照以上比例现配现用。

 

四:标本染色:

1. 充分干燥(室温2小时以上或过夜)的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈,然后滴加固定液50μl,室温静置2-3分钟,用PBS淋洗,擦干玻片背面及细胞外的PBS。

*以下反应均需在湿盒中进行。

2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8单抗适量(10-30μl,4℃过夜,PBS淋洗3次。

3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG适量(10-30μl),37℃孵育30-45分钟,PBS淋洗3次。

4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量(10-30μl)37℃孵育30-45分钟,PBS淋洗3次。

5. 滴加显色剂30-50μl,室温显色20-40分钟。可在显微镜下观察,待细胞膜上出现红色标记物时,用PBS淋洗。

6. 滴加细胞核复染液30-50μl,30秒后自来水淋洗。

7. 滴加封片剂,盖片封片,镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。

 

五:观察:

 

高倍镜下选取染色好的视野记数100-200个单个核细胞,细胞表面有红色标记物为阳性细胞。算出阳性率

 

六:正常参考值:

 

正常人外周血中,阳性细胞百分率一般在:CD3,60-80%;CD4,35-55%;CD8,20-30%;CD4/CD8的比值在1.5-2.0范围内。

 

七:储存条件及有效期:

 

2-8℃保存,禁止冷冻,有效期为12个月。有效期内可在0-25℃范围内七天短时运输。使用时应及时及拿及用,使用后应立即放回冰箱。生产日期,使用期限或失效日期见标签。

 

八:注意事项:

 

1. 免疫细胞化学检测是一种包含多步骤的检测方法,试剂的选择、样本的处理、涂片的制备、染色及其结果的判读均需要进行专业的培训。

2. 任何阳性或阴性的解读,应由病理科医生结合病理形态学,临床表现及其它检测方法进行,不作为单独的诊断指标。

3. 复染过度或不足都可能影响结果的判读。

4. 阴性结果表示未检出抗原,不一定表示样本中无该抗原存在,待测抗原编码基因变异,抗原低表达或抗原修复不当等,都会造成抗原无法检出。

5. 本试剂仅对经处理的人外周血细胞进行验证,不做其他用途

6. 试剂盒使用中,应有适当的防护措施,以避免试剂同皮肤和眼睛接触。

 

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