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信帆生物带您了解更新更全的明胶酶谱分析试剂盒检测原理

发布时间:2019-06-12   点击次数:53次

信帆生物带您了解更新更全的明胶酶谱分析试剂盒检测原理

随着科技的进步,明胶酶谱法实验被越来越多的科学研究者用于各类实验,那么明胶酶谱的原理是什么呢?让我们一起来揭秘吧!

首先让我们来了解一下酶谱法的原理。基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲系统中使样品中的MMP-2和MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,最后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-2和MMP-9活性成正比。

上海信帆生物供应明胶酶谱分析试剂盒,也叫明胶酶谱电泳试剂盒,该试剂盒的原理又是怎样的呢

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理1和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0。1~0。5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。

 

凝胶制备

1.玻璃板对齐后放入夹中,垂直卡紧,加满水检漏。

2.配10%分离胶,APS和TEMED作用为促凝,最后灌胶前加。若板不漏水,则将水倒出,并用吸水纸洗净后灌胶,灌至大约3/4处,上面加满水压平。

3。配浓缩胶,同样地,APS和TEMED最后加,分离胶灌入约30min后观察小烧杯中剩余分离胶是否已凝,同时仔细观察可见玻板水和胶间有一条折线,说明胶已凝固。

4.将上面的水倒去,吸水纸洗净,灌入浓缩胶,灌满,注意一定不要有气泡,然后将梳子插入,注意保持水平,约30min后凝固可用。

5。拔梳子在电泳缓冲液中拔,加样孔用小针筒冲洗干净再上样,注意上样时勿使样品逸至邻孔,样品混匀时要轻,不要产生气泡,否则加样时易导致逸出而使结果不准确。

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